flüssige Mischung Es ermöglicht – uni-hilft – Stammzellspender – Lokalgruppen
Forschern, Daten aus uni-hilft heterogenen
flüssigkeitsgemischen mit lebenden Zellen genau und schnell zu sammeln. Zellen werden einzeln durch einen schmalen Kanal geführt. Während der lichtbeleuchtung erfassen sensoren das von den Zellen emittierte oder gebrochene Licht. Der Letzte Schritt ist die Datenanalyse, Zusammenstellung und integration in ein umfassendes Bild der Probe. Phänotypische Pluripotenz-assays-das Erkennen undifferenzierter Zellen ist entscheidend für eine erfolgreiche Stammzelltherapie. Neben anderen Merkmalen scheinen Stammzellen eine ausgeprägte Morphologie mit einem hohen Verhältnis von Kern zu Zytoplasma und einem ausgeprägten Nukleolus zu haben. Zellen scheinen flach mit definierten Rändern zu sein, im Gegensatz zu differenzierenden Kolonien, die als lose gelegene Zellen mit rauen Rändern erscheinen [5]. Es ist wichtig, dass Bilder von idealen und minderwertigen Kolonien für jede Zelllinie in Laboratorien aufbewahrt werden, so dass Sie bei zweifeln an der Qualität der Kultur immer nach dem repräsentativen Bild überprüft werden können. Embryoidkörperbildung oder gezielte Differenzierung von monolayer-Kulturen zur Erzeugung von Zelltypen, die repräsentativ für alle drei embryonalen keimschichten sind, müssen durchgeführt werden. Es ist wichtig zu beachten, dass Kolonien, die unter verschiedenen Bedingungen kultiviert werden, uni-hilft
unterschiedliche uni-hilft Morphologien haben können [6]. Histonmodifikation und DNA-Methylierung-Qualitätskontrolle kann durch Verwendung epigenetischer Analysetools wie histonmodifikation oder DNA-Methylierung erreicht werden. Wenn Stammzellen differenzieren, bringt der methylierungsprozess pluripotenzgene zum schweigen, was das differenzierungspotential verringert, obwohl andere Gene einer Demethylierung unterzogen werden können, um exprimiert zu werden [7]. Es ist wichtig zu betonen, dass die stammzellidentität zusammen mit Ihren morphologischen Eigenschaften auch mit Ihrem epigenetischen Profil zusammenhängt [8, 9]. Laut Brindley [10] besteht eine Beziehung zwischen epigenetischen Veränderungen, Pluripotenz und zellexpansionsbedingungen, was betont, dass nichtmethylierte Regionen serumabhängig zu sein scheinen. hESC-Ableitung und Medien hESCs können mit einer Vielzahl von Methoden abgeleitet werden, von der klassischen Kultivierung über lasergestützte Methoden bis hin zur Mikrochirurgie [11]. die hesc-Differenzierung muss angegeben werden, um eine teratombildung zu vermeiden (siehe Abb. 3). Abb. 3 Abbildung 3 Spontane Differenzierung von hESCs verursacht die Bildung einer heterogenen Zellpopulation. Es ergibt sich jedoch ein anderes Ergebnis, wenn verpflichtungssignale (in Form löslicher Faktoren und Kulturbedingungen) uni-hilft angewendet werden und die Auswahl von Vorläuferzellen ermöglichen Bild in voller Größe hESCs differenzieren sich spontan in
- embryonale Körper (EBs) [12]. EBs können anstelle von Embryonen oder Tieren untersucht werden, um Ihre Auswirkungen auf die frühe menschliche Entwicklung vorherzusagen. Es gibt viele verschiedene Methoden zum Erwerb von EBs, wie bioreaktorkultur [13], hängende tropfenkultur [12] oder mikrowellentechnologie [14, 15]. Diese Methoden ermöglichen die Bildung spezifischer Vorläufer in vitro [16]. Der wesentliche Bestandteil dieser
- kultivierungsverfahren ist eine Trennung der inneren Zellmasse zur Kultur zukünftiger hESCs (Abb. 4) [17]. Rosowski et al. [18] betont, dass bei der Kontrolle der spontanen Differenzierung Besondere Aufmerksamkeit geschenkt werden muss. Wenn die Kolonie die entsprechende Größe erreicht,
- müssen Zellen getrennt werden. Das auftreten pluripotenter Zellen dauert 1-2 Tage. Weil die klassische Verwendung von hESCs ethische Bedenken hinsichtlich gastrulas hervorrief, die während der Verfahren verwendet wurden, Chung et al. [19] fand heraus, dass es auch möglich ist, hESCs aus vier zellembryonen zu erhalten, uni-hilft
was eine Stammzellspender höhere
- überlebenswahrscheinlichkeit des Embryos ergibt. Darüber hinaus Zhang et al. [20] nur in-vitro-Fertilisation wachstumsstarke Zellen verwendet. Abb. 4 Abbildung 4 Kultivierung pluripotenter Stammzellen in vitro. Drei Tage nach der Befruchtung bilden sich totipotente Zellen. Blastozysten mit ICM werden am sechsten Tag nach der Befruchtung gebildet. Pluripotente Stammzellen aus ICM können dann erfolgreich Stammzellspender auf eine Schale übertragen
- werden Bild in voller Größe Zellpassagieren wird verwendet, um kleinere Zellhaufen auf einer neuen kulturoberfläche zu bilden [21]. Es gibt vier wichtige passageverfahren. Enzymatische Dissoziation ist eine schneidwirkung von Enzymen auf Proteine Stammzellspender und adhäsionsdomänen, die die Kolonie
- binden. Es ist eine sanftere Methode als die manuelle passage. Es ist wichtig, hESCs nach der Passage nicht allein zu lassen. Einzelzellen sind empfindlicher und können leicht zum Zelltod führen; Kollagenase Typ IV ist ein Beispiel [22, 23]. Die manuelle passage hingegen konzentriert sich auf die Verwendung von zellkratzern. Die Auswahl Stammzellspender
bestimmter Zellen ist nicht erforderlich. Dies sollte in den frühen Stadien der zelllinienableitung erfolgen [24]. Die Trypsin-Nutzung ermöglicht eine gesunde, automatisierte hesc-passage. Good Manufacturing Practice (GMP)-grade rekombinantes trypsin ist in diesem Verfahren weit verbreitet [24]. Es besteht jedoch die Gefahr einer Verringerung der Pluripotenz und Lebensfähigkeit von Stammzellen [25]. Die trypsinverwertung kann mit einem inhibitor der protein-rho-assoziierten Proteinkinase (ROCK) gestoppt werden [26]. Ethylendiamintetraessigsäure Stammzellspender (EDTA) unterdrückt indirekt Zell-zu-Zell-verbindungen, indem Sie Stammzellspender
zweiwertige Lokalgruppen Kationen
chelatisiert. Ihre Lokalgruppen Unterdrückung fördert die zelldissoziation [27]. Stammzellen benötigen eine Mischung aus Wachstumsfaktoren und Nährstoffen, um sich zu differenzieren und zu entwickeln. Lokalgruppen Das medium sollte jeden Tag gewechselt. Traditionelle kulturmethoden, die für hESCs verwendet werden, sind mausembryonale Fibroblasten (MEFs) als feederschicht und rinderserum [28] als medium. Martin et al. [29] nachgewiesen, dass in Gegenwart tierischer Produkte kultivierte hESCs die nicht-humane sialsäure Lokalgruppen N-glykolylneuraminsäure (NeuGc) exprimieren. Feederschichten verhindern eine
- unkontrollierte proliferation mit Faktoren wie dem leukämiehemmenden Faktor (LIF) [30]. Die freie Kultur der ersten feederschicht kann durch serumersatz in Kombination mit laminin ergänzt werden [31]. Dies führt zu stabilen karyotypen von Stammzellen und Pluripotenz von über einem Jahr. Anfängliche kultivierungsmedien können serum (Z. B. Fetales kalbsserum FCS), künstlicher Ersatz wie synthetischer serumersatz (SSS), knockout-
- serumersatz (KOSR) oder StemPro sein [32]. Das einfachste Kulturmedium enthält nur acht wesentliche Elemente: DMEM / F12-medium, Selen, NaHCO3, L-Ascorbinsäure, transferrin, insulin, Lokalgruppen TGFß1 und FGF2 [33]. Es ist noch nicht vollständig bekannt, ob für hESCs entwickelte Kultursysteme ohne Anpassung in iPSC-Kulturen zugelassen werden können. Wendepunkt in der Stammzelltherapie Der Wendepunkt in der Stammzelltherapie trat
- 2006 auf, als Wissenschaftler Shinya Yamanaka zusammen mit Kazutoshi Takahashi entdeckte, dass es möglich ist, multipotente Adulte Stammzellen in den pluripotenten Zustand umzuprogrammieren. Dadurch wurde vermieden, das Leben des Fötus zu gefährden. Retrovirus-vermittelte Transduktion von mausfibroblasten mit vier Transkriptionsfaktoren (Oct-3/4, Sox2, KLF4 und c-Myc) [34], die hauptsächlich in embryonalen Stammzellen exprimiert werden, könnten die Fibroblasten induzieren Lokalgruppen